人神经营养因子-3在哺乳动物细胞中瞬时表达和稳定表达的初步研究 

将人神经营养因子 - 3全长 c DNA克隆入真核表达载体 pc DNA3,分别在 COS- 7细胞和CHO细胞中获得了瞬时表达和稳定表达。经大乳鼠脊髓背根神经节测活 ,瞬时表达和稳定表达产物均能明显促进其神经突起的生长 ,瞬时表达量约为 1 0 -7g/m L,稳定表达量可达 1 0 -8g/m L
欧阳立明;周涛;薛冲;刘志敏;张嗣良 下载次数(47)| 被引次数(1)

人神经营养因子-3重组逆转录病毒的包装与鉴定 

在逆转录病毒载体pLXSN中引入人神经营养因子 3(hNT 3) ,构建成重组质粒pLXSN NT3,转染包装细胞PA317后经G418筛选得到几个稳定产毒的细胞克隆。测定这几个克隆的病毒滴度 ,最高达到 1 6 0× 10 5 ,且产毒细胞株不产生复制型病毒。PCR和大乳鼠背根神经节活性检测证明hNT 3已整合到宿...
欧阳立明;周涛;薛冲;刘志敏;张嗣良 下载次数(40)| 被引次数(1)

TMV蚕豆株系CP基因及3′端非编码区序列分析与表达 

根据烟草花叶病毒U1株系TMV-U1序列,人工合成引物,通过PCR扩增并克隆了烟草花叶病毒蚕豆株系(TMV-B)的外壳蛋白(CP)基因和3′端非编码区.DNA全序列测定结果表明,外壳蛋白基因全长459个碱基,编码151个氨基酸,3′端非编码区全长224个碱基.与TMV-U1株系相比,TMV-B仅在CP基因上有一个碱基缺...
刘勇;周雪平;李德葆;刘志敏 下载次数(42)| 被引次数(0)

植物转录因子的超表达及其在分子育种中的应用 

植物在生长发育过程中经常遭受到许多生物和非生物因素的胁迫,需要通过对基因的调控来适应,而转录因子在植物的生长发育和防卫反应的表达调控中有着非常重要的作用,因此需要对转录因子的功能进行深入的研究。为了研究转录因子的功能,一系列的反遗传学工具随之发展起来,包括超表达、反义抑制、基因敲除等,而最为普遍的则为基因敲除技术与超表...
张秋平;杨宇红;谢丙炎;刘志敏 下载次数(1053)| 被引次数(35)

巴斯德毕赤酵母的基因表达系统研究进展 

巴斯德毕赤酵母是一种近年来广泛使用的基因表达系统 ,它具有表达率高、遗传稳定、产物可分泌、发酵工艺成熟等许多优点 .综述了该系统在载体类型、载体元件 (包括启动子、选择标记和信号肽序列 )、受体类型、以及提高整合拷贝数等方面的进展
欧阳立明;张惠展;张嗣良;刘志敏 下载次数(1126)| 被引次数(280)

分子伴侣及信号肽对毕赤酵母中分泌蛋白表达水平的影响 

目的:探索定位于细胞质、内质网膜及内质网腔中的分子伴侣及其组合对于带有不同信号肽的胞外β-1,3-葡聚糖酶(EXG1)在巴斯德毕赤酵母GS200中表达水平的影响。方法:通过融合PCR技术分别构建带有酵母α交配因子引导肽序列(αMF)、酵母α交配因子信号肽序列(αPre)和重链结合蛋白(Bip)信号肽序列的报告蛋白EXG...
杜济良;赵洪亮;薛冲;任敏;刘志敏 下载次数(532)| 被引次数(9)

不同信号肽对胞外β-(1,3)-葡聚糖酶在巴斯德毕赤酵母中表达的影响 

目的:在胞外β-(1,3)-葡聚糖酶成熟肽的N端添加不同类型的信号肽,研究不同信号肽对其在巴斯德毕赤酵母中表达水平的影响。方法:通过融合PCR方法将α成熟交配因子(MFα)、成熟交配因子Pre肽(αPre)和共翻译转运信号肽(Bip信号肽)等3种信号肽的DNA片段连接至胞外β-(1,3)-葡聚糖酶成熟肽基因的5′端,利...
杜济良;赵洪亮;薛冲;任敏;刘志敏 下载次数(339)| 被引次数(6)

人胰高血糖素样肽-1与人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的表达 

目的:在巴斯德毕赤酵母中表达有降糖活性的人胰高血糖素样肽-1(hGLP-1)突变体(2Gly-hGLP-1)与人血清白蛋白(HSA)的融合蛋白。方法:为将GLP-1氨基酸序列第2位的丙氨酸(Ala)定点突变为甘氨酸(Gly),根据毕赤酵母偏爱密码子合成编码2Gly-hGLP-1的基因;采用重叠PCR法拼接2Gly-hG...
龙娟;薛冲;赵洪亮;杨晓红;刘志敏 下载次数(257)| 被引次数(4)

高比活人睫状神经营养因子突变体基因的构建及其在巴斯德毕赤酵母中的表达 

人睫状神经营养因子(hCNTF)及其突变体有望成为治疗肥胖症的新型药物。为了减少hCNTF的副反应,提高其疗效,在hCNTF四重突变体AX15 (R13K)的基础上引入S16 5D Q16 6H突变,构建了高比活的DH_AX15 (R13K)突变体。体外和体内实验表明DH_AX15 (R13K)的活性约是AX15 (R...
赵洪亮;薛冲;熊向华;张伟;刘志敏 下载次数(65)| 被引次数(0)

TIMP-2在毕赤酵母中的克隆与表达 

为了克隆人基质金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)基因,并在Pichia pastoris中表达,根据GenBank上的TIMP-2的氨基酸序列和毕赤酵母偏爱密码子,通过化学合成和PCR相结合的方法获得了人的TIMP-2基因全长序列,构建了pPIC9-T2表达载体,电击转化到毕赤酵母,通过表型筛选和诱导表达得到蛋白...
闫训友;赵洪亮;张惟广;薛冲;刘志敏 下载次数(108)| 被引次数(2)

人甲状旁腺激素在大肠杆菌中的表达及鉴定 

化学合成人甲状旁腺激素 (hPTH)全长基因 ,克隆到大肠杆菌表达载体pBV2 2 0和pET2 2b中 ,获得了高表达。经破菌、阳离子交换层析、反相层析纯化获得了纯度大于 95 %的纯品。N端测序、质谱分析结果表明重组hPTH结果完整 ,N端无Met或fMet。生物活性试验证明重组hPTH具有激活腺苷酸环化酶、增加骨...
方宏清;戴红梅;李彦英;赵洪亮;刘志敏;朱厚础;马清… 下载次数(109)| 被引次数(4)

巴斯德毕赤酵母表达系统中甘油阻遏相关基因GR1的分离克隆与鉴定 

目的:分离克隆并鉴定巴斯德毕赤酵母表达系统中甘油阻遏相关基因。方法:PCR扩增LacZ基因,克隆至pPIC9载体,构建pPIC9-LacZ表达载体,经SalⅠ线性化后转化巴斯德毕赤酵母GS115,构建GS115-LacZ模式菌株;用限制酶介导整合(REMI)技术使GS115-LacZ菌体基因组产生随机突变,筛选甘油去阻...
姚学勤;薛冲;赵洪亮;何庆;孙博;刘志敏 下载次数(160)| 被引次数(1)

不同分泌信号对豹蛙酶在巴斯德毕赤酵母中分泌效率的影响 

目的:研究不同分泌信号对豹蛙酶(ONC)在巴斯德毕赤酵母中分泌效率的影响。方法:根据已知天然ONC的氨基酸序列,结合酵母偏爱密码子,设计并合成了ONC基因序列,通过融合PCR获得了不同分泌信号与ONC的融合基因,将其克隆至表达载体pPIC9k中,然后将线性化的重组表达载体电击转化GS115毕赤酵母感受态细胞,通过SDS...
何庆;赵洪亮;薛冲;姚学勤;孙博;刘志敏 下载次数(115)| 被引次数(2)

毕赤酵母醇氧化酶1启动子突变体的分离与鉴定 

目的:通过醇氧化酶1启动子突变,筛选毕赤酵母高水平表达菌株。方法:通过致错PCR构建醇氧化酶1启动子突变体,经酶切连接到改造过的质粒HSA-pPIC9上,转化毕赤酵母GS115感受态细胞,摇瓶培养表达筛选人血清白蛋白(HSA)高表达突变体菌株。结果:克隆测序结果表明,突变的醇氧化酶1启动子-910和-569位点处共2个...
熊向华;赵洪亮;薛冲;王洋;陈惠鹏;刘志敏 下载次数(234)| 被引次数(7)

Pichia pastoris发酵表达重组人复合α干扰素 

在Pichia pastoris表达系统中,研究了甘油补料周期、甲醇流加策略和诱导pH对cIFN表达的影响,优化后的发酵条件是:甘油补料周期为4 h,诱导pH为5.0,基于在线甲醇检测维持甲醇浓度不超过5 g/L。培养96 h后,最大细胞干重、cIFN的表达量和生物活性分别达到168 g/L、1.24 g/L和5.4×...
郝玉有;庄英萍;王永红;张嗣良;储炬;刘志敏 下载次数(120)| 被引次数(1)

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